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técnica de biologia molecular para detectar interações proteína-proteína in vivo

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SPINE significa experimento de interação strep–proteína. SPINE é uma ferramenta poderosa para detectar interações proteína–proteína in vivo. A proteína isca deve ser expressa com uma Strep-tag sob as condições em que os potenciais parceiros de interação estão presumivelmente presentes nas células. A adição de formaldeído liga a proteína isca aos seus potenciais parceiros de interação. A proteína isca juntamente com seus potenciais parceiros de interação pode então ser isolada usando uma coluna de Strep-Tactin Sepharose. As ligações cruzadas entre a proteína isca e o potencial parceiro de interação podem ser clivadas aquecendo as amostras em tampão Laemmli. Finalmente, o parceiro de interação co-purificado pode ser separado por SDS PAGE e identificado por espectrometria de massas.

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