SpyCatcher

O sistema SpyTag/SpyCatcher é uma tecnologia para conjugação irreversível de proteínas recombinantes. O peptídeo SpyTag (13 aminoácidos) reage espontaneamente com a proteína SpyCatcher (12,3 kDa) para formar uma ligação isopeptídica intermolecular entre o par. A sequência de DNA que codifica SpyTag ou SpyCatcher pode ser introduzida recombinantemente na sequência de DNA que codifica uma proteína de interesse, formando uma proteína de fusão. Essas proteínas de fusão podem ser ligadas covalentemente quando misturadas em uma reação através do sistema SpyTag/SpyCatcher. Por meio do par Tag/Catcher, a bioconjugação pode ser alcançada entre duas proteínas recombinantes que de outra forma seriam restritivas ou impossíveis com a fusão genética direta tradicional entre as duas proteínas. Por exemplo, problemas relacionados ao enovelamento de proteínas, hospedeiro de expressão subótimo e modificações pós-traducionais especializadas podem ser aliviados separando a produção das proteínas com a modularidade do sistema Tag/Catcher. Desenvolvimento e mecanismo de reação SpyTag e SpyCatcher foram formados a partir da divisão e engenharia do domínio CnaB2 da proteína FbaB de Streptococcus pyogenes, que naturalmente forma uma ligação isopeptídica intramolecular para auxiliar na colonização da célula hospedeira. Com a formação da ligação isopeptídica, o domínio CnaB2 torna-se mais tolerante a mudanças conformacionais, térmicas e de pH.